FDA發布本指南的目的是為研究性新藥申請（IND）發起人和生物制品許可申請（BLA）或BLA補充申請的申請人提供在考慮是否提交基因療法、載體疫苗和相關重組病毒或微生物產品（GTVVs）的環境評估（EA）時的建議。本指南還包含了關于EA中應該包含哪些信息以及EA提交后可期望結果的建議。本指南最終確定了2014年6月的同名指南草案。本指南還補充了1998年7月題為“行業指南：人類藥物和生物制劑應用的環境評價”的指南（1998年7月27日，63 FR 40127）（1998年指南），并取代了1998年的指南第IV.B.1節“評估對環境生物的毒性”中對GTVV的建議。
FDA的指導文件，包括本指南，不具規定依法強制執行的責任。相反，除非引用了具體的法規或法律要求，本指南中描述了本機構目前對該主題的看法，應僅被視為建議。在本機構指南中使用“應該(should)”一次，僅指建議或推薦考慮的某事，而非必須的。
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1969年的國家環境政策法案（NEPA）要求所有聯邦機構評估其行為對環境的影響，并確保相關人士和受影響的公眾了解這些環境分析。環境質量委員會（CEQ）負責監督聯邦政府遵守NEPA的成果。CEQ條例規定了實施NEPA程序，可見聯邦法規法典（CFR）第1500至1508部分的第40條，該程序對FDA具有約束力。
FDA已經采用了程序來補充CEQ的法規。FDA的NEPA政策和程序可在 CFR第21條第25部分中找到。這些法規明確提出，所有要求申請機構的申報行為（例如，IND、BLA和BLA的補充）必須附有EA或分類豁免的聲明（21 CFR 25.15(a)）
1997年，FDA修訂了其NEPA條例，以提高機關執行NEPA的效率，并減少NEPA評估的數量，規定對更多類別的申報進行分類豁免，這些申報通常已被確定為不會對環境質量產生單獨或累積的重大影響，因此不需要環境影響報告書（EIS）或EA。請注意，在正常情況下可豁免的申報，如果在“特殊情況”中表明具體的擬申報可能對環境質量產生重大影響，FDA將要求符合分類豁免的申報項目至少進行一次EA（21 CFR 25.21 and 25.31）。
如果申請機構未能提交用于申報行動時足夠的環境評估（報告），除非該機構能夠確定申報的項目符合分類豁免的條件，否則FDA有充分的理由拒絕提交申請或拒絕批準申請(21 CFR 25.15(a))。機構會評估EA中包含的信息，以確定是否有必要準備EIS（21 CFR 25.15(b)）。如果申報的項目不會對環境質量產生重大影響，那么機構將準備一份“未發現重大影響（FONSI）”的調查結論（21 CFR 25.15(b)）。
本指南描述了在確定您是否需要為您的GTVV的IND、BLA或BLA補充文件提交EA，或您的提交材料是否符合21 CFR 25.31規定的分類豁免條件時應考慮的問題。此外，對于那些需要提交EA的GTVV的IND、BLA或BLA補充，本指南提供了關于EA提交內容和格式的信息。EA應關注與FDA監管的物品相關的環境問題。FDA認為其行為對環境的影響是其監管過程的一個組成部分，且FDA在審查過程中會根據《聯邦食品、藥品和化妝品法》（FD&C法）和《公共衛生服務法》（PHS法）對FDA監管產品對人類和公共健康的影響進行例行評估，因此無需在EA中解決。
請注意，CBER不會對主文檔（MFs）采取任何措施（如CEER不通過/拒絕主文檔的遞交）。因此，NEPA不適用于MF，也不需要為MF提交EA或分類豁免申請。然而，如果需要為某一特定的IND、BLA或BLA補充提交EA，可能需要提交MF中的某些信息來解決相關的環境問題。此外，FDA在確定某項特定的IND、BLA或BLA補充文件是否符合分類排除的條件時，可考慮MF中包含的信息。
本指南的范圍包括以傳染病為適應癥的基因療法和載體疫苗的IND、BLA和BLA補充的EA的注意事項（即是否需要提交EA）。本指南還包括對使用重組DNA技術產生的相關病毒和微生物（例如，由點突變或基因缺失產生的病毒/微生物）的IND、BLA和BLA補充材料的EA的考慮。對于用傳統方法（如連續傳代和重組蛋白疫苗）生產的減毒疫苗或微生物活疫苗的IND、BLA和BLA補充的EA注意事項不在本指南范圍內。
所有研究機構的申報（例如，IND和BLA）都必須附有EA或分類豁免聲明（21 CFR 25.15(a)）。如上所述，某些類別的申請受到分類豁免的限制，因此，通常不需要編寫EA，因為作為一個類別，該機構已經確定這些單獨或累積的處理不會對環境質量產生重大影響（21 CFR 25.15(c)）。通常不需要提交EA的案例應包括以下內容：
1. BLA和BLA補充文件提交FDA的申請材料中沒有增加活性物質的使用（21 CFR 25.31(a)）；
2.提交FDA的BLA及BLA補充呈件中表明該物質及其代謝物或降解產物在環境中的濃度或分布不會發生明顯改變，適用于天然存在于環境中的物質（21 CFR 25.31(c)）
3.INDs（21 CFR 25.31(e)）
對于根據21 CFR 25.31規定的分類豁免需提交的材料，如果您聲明所提交的文件（例如，IND或BLA呈件）符合分類豁免的條件，引用所要求的特定分類豁免，并且聲明不存在特殊情況，則不需要提交EA（21 CFR 25.15(d)）。
通常情況下，您不需要提供數據來支持您的申請符合分類豁免的要求。然而，如果需要的話，監管局則要求提交提供額外的數據，以確定符合分類豁免的標準。正如下文所詳細討論的，如果監管局認為某產品因特殊情況而不屬于分類豁免時，您將需要提交一份EA（21 CFR 25.21）。
A．IND申請
通常情況下，申請機構的IND申請不需要提交EA，除非有特殊情況證明該物質可能會對環境質量產生重大影響（21 CFR 25.31(e)）（見21 CFR 25.21和本文件第四節C）。FDA認為，在大多數情況下，申請機構對使用GTVV的臨床研究的IND申報不會對環境質量產生重大影響，因為這些臨床試驗受到嚴密監控，并且僅限于指定的研究組。然而，如果有特殊情況表明申請機構的IND的可能會對環境質量產生重大影響；那么，分類豁免將不適用，監管局則要求其編寫及提交EA（21 CFR 25.21）。
申請人希望IND申報獲得分類豁免時必須在IND申請的環境分析部分（21 CFR 312.23(a)(7)(iv)(e)）提出聲明。在申請分類豁免時，申請人必須說明所申請的項目符合分類豁免的條件，引用所要求的特定分類豁免，并說明不存在特殊情況（21 CFR 25.15（d））。為了遵守規定，我們建議在IND的環境分析部分包含以下聲明：
根據21 CFR 25.31(e)中進行分類豁免的規定，我們主張不需要準備環境評估。我們所申報的項目符合分類豁免的標準。此外，我們沒有察覺此申報項目需要準備EA的任何特殊情況。
B．許可申請
25.31(c)部分規定，對于 “天然存在于環境中的物質，如果申報FDA項目沒有明顯改變該物質及其代謝物或降解產物在環境中的濃度或分布”，FDA批準BLA時可予以分類豁免。
1. 就21 CFR 25.31(c)而言， FDA不認為GTVV是“天然存在于環境中”。
在確定GTVV是否為21 CFR 25.31(c)中所描述的“天然存在于環境中”的物質時，FDA考慮GTVV是否包括來自不同屬的功能性蛋白質編碼序列。具體地，就21 CFR 25.31(c)而言，包含來自和表達該的生物體不同屬的功能性蛋白質編碼序列的GTVV不認為是 “天然存在于環境中的”。相反，根據該條例，包含來自同屬的一個或多個物種的功能性蛋白質編碼序列的GTVV被認為是“天然存在于環境中的”。由此，FDA不認為大多數GTVVs是“天然存在于環境中”的物質，因為大多數GTVVs包含來自不同屬的功能性蛋白質編碼序列。因此，如果申報的GTVVs如果被設計為表達一種或多種不同屬的蛋白質時，申請機構應提供一份EA，因為FDA認為其不符合分類豁免的標準（見21 CFR 25.15和25.31（c））。相關GTVV例子例如表達病毒包膜蛋白的質粒疫苗，或表達人體酶類的病毒載體。
2. 就21 CFR 25.31(c)而言，GTVVs被視作“天然存在于環境中”的情況。
FDA認為，符合21 CFR 25.31(c)中a.和d.節所描述的GTVV是“天然存在于環境中”的物質。因此，此類GTVV的申請符合21 CFR 25.31(c)規定的分類豁免條件。對于符合21 CFR 25.31(c)所規定的分類豁免條件并遵守法規提交的BLA，我們建議在許可申請的環境分析部分包含以下聲明：
根據21 CFR 25.31(c)進行分類豁免的規定，我們主張不需要準備環境評估。我們所申報的項目符合分類豁免的標準。此外，我們沒有察覺此申報項目需要準備EA的任何特殊情況。
a．FDA通常認為，符合21 CFR 25.31(c)中所描述的，含有來自同屬的一個或多個物種的功能性蛋白質編碼序列的GTVVs是“天然存在于環境中的”。例如，涉及同屬內多個物種的遺傳物質組合的重組病毒符合21 CFR 25.31(c)所述的分類豁免條件。這種重組病毒通常被認為是天然存在的，只要它們不包含來自一個以上的屬的序列，無論它們是通過傳統的合并感染方法還是使用重組DNA技術產生的。
b．就21 CFR 25.31(c)而言，FDA通常將僅在減弱點突變或缺失方面與野生型物質不同的GTVV視作“天然存在于環境中”的物質，因為此類突變可作為復制/繁殖過程中的自然變異。將這些變化引入野生類物質的原因可能包括以下幾個方面：
●降低毒性
●限制該產品在人體中的復制能力（即通過改變病毒的結構來抑制病毒的組裝）。
c．FDA認為通過特定的工藝步驟消除其復制能力而滅活的GTVV是“天然存在于環境中”的物質，因為它們沒有生命力并且可被環境中的物質降解。
有許多滅活生物制品的方法可以保留功能（例如，甲醛滅活的病毒制劑可以保留足夠的免疫原性作為疫苗使用）。在這樣的情況下，為了證明您的產品符合21 CFR 25.31(c)中“天然存在于環境中”的標準，你應證明該產品已被滅活，無法通過工藝驗證和/或批次釋放檢測進行復制，并通過有效的質量控制程序進行維護。監管局將仔細審閱這些方法，以符合藥品生產質量管理規范（GMP）。
d．就21 CFR 25.31(c)中所述，FDA通常認為由基因修飾的人類細胞組成的GTVV是“天然存在于環境中”的物質，因為這些細胞對生存和復制有嚴格的營養要求，因此在環境中無法生存，并被降解為自然存在的物質。
C．特殊情況
根據21 CFR 25.21和40 CFR 1508.4的規定，如果存在可能“顯著”影響環境質量的特殊情況，FDA將要求被分類豁免的項目提供EA（21 CFR 25.21）。
在研究和上市階段都可能存在特殊情況；然而，監管局認為，GTVV的申請會出現可能嚴重影響研究階段或營銷階段的環境質量的特殊情況相對比較少。
在評估您的GTVV產品是否呈現可能“顯著”影響環境質量的特殊情況時，CBER建議您重點關注以下潛在適用于“顯著”（40 CFR 1508.27）定義的內容：
1. GTVV對環境質量的影響程度可能會引起很大爭議（40 CFR 1508.27(b)(4)）。
2.GTVV對人類環境可能產生的影響程度是高度不確定的或涉及特定或未知風險的（40 CFR 1508.27（b）（5））
3. GTVV可能對基于1973年《瀕危物種法》（40 CFR 1508.27(b)(9)）確定的瀕危或受威脅物種或其棲息地產生不利影響的程度。
4. GTVV對環境的影響是否威脅到違反聯邦、州或地方法律或為保護環境而實施的要求（40 CFR 1508.27(b)(10)）。
GTVVs的IND、BLA和BLA補充文件所提交的EA格式應遵循1998年的指南，并提供本指南中以下四個部分所建議的額外信息：“確定擬申報的物質”；“確定和評估對環境的潛在影響”；“解決措施”；以及“提出替代方案”。
A．確定擬申報的物質
我們建議，GTVV的環境影響評估應包括對擬申報項目中所涉物質的描述以及對釋放到環境中的潛在代謝物、降解物或副產品的描述。
如果產品在用藥后發生降解，本文件第V.B節中確定的環境影響可能只包括對釋放的降解產物有關的影響。例如，在復制缺陷的病毒載體通過肌肉注射給藥的情況下，旨在證明載體DNA釋放到環境中（可通過PCR檢測注射部位和/或排泄物），以及沒有釋放完整的病毒（可通過感染性試驗檢測）的數據，可證明在EA中只考慮載體DNA對環境的影響是合理的。
您還應確定GTVVs釋放到環境中已知的和潛在的變量。我們建議你提交實驗數據，以描述理論或觀察到的變量比GTVV具有更大潛在環境風險的。例如，設計成有復制缺陷，但具低水平復制能力的GTVVs產品可能作為雜質存在。在給藥時，這種具有復制能力的雜質可能會在患者或志愿者中引發感染，并且傳播至其他人并對易感個體或人群造成疾病或傷害。當GTVVs本身具有復制能力時，自然選擇可能會導致具有選擇優勢的變異的發展。由于突變、復制錯誤或重組，這些變異情況可能在生產過程中或產品服用后出現。
B．確定和評估對環境的潛在影響
本節應確定與擬申報項目相關的環境影響。提出對每種環境影響的程度和可能性的評估，并對環境的總體風險給出結論。我們建議您在早期開發過程中咨詢監管局，以了解在提交BLA時EA中需要呈現哪些類型的數據作支持。當處理與GTVV相關的環境問題時，您應遵循以下建議。我們專門為GTVV制定了這些建議，以取代1998年指南中題為 "評估對環境生物的毒性 "的第IV.B.1節的建議。
1.確定對環境潛在的影響
要確定潛在的環境影響，您應考慮以下因素：
a．親代菌株和/或載體表型的特征。
i．該菌株或載體是否具有毒性、致病性，或已知與動物、植物或微生物的毒性有關？
ii．是否了解其環境分布、宿主范圍和向性？
iii．是否存在可能限制生長或繁殖的底物？
iv．該菌株或載體是否對抗生素、抗病毒藥物或抗菌素敏感？
v．關于該菌株或載體的自然種群中基因交換的遺傳穩定性和流行程度的已知情況？
vi．對該菌株或載體在環境中的穩定性了解多少，該菌株是否能夠在不利條件下生存（孢子、休眠等）？
b. GTVVs可被引入的環境：
i．產品是否具有可能使其比自然生物具有選擇優勢的性狀？
ii．易感物種是否會受暴露？
iii．環境提供的生長或繁殖能力是有限的還是減少的？
iv．在環境中，與產品密切相關的物種或菌株會否受到影響？
v．產品的擴散能被環境中的屏障自然地控制嗎？
vi．關于監測和緩解計劃的有效性，我們了解了多少？
c. 遺傳學改變的屬性：
i．這種改變是否會影響產品的復制能力？
ii．在目標人群之外，轉基因的表達或暴露會產生什么影響？
iii．對已改變序列的遺傳穩定性了解多少？
2.評估潛在影響環境的程度
環境影響的程度是指后果的嚴重性，小至可忽略和自限性的后果，大到那些將是嚴重的、具有嚴重影響或導致長期、永久性有害后果的后果。影響的程度取決于釋放到環境中的成分和受暴露的生物體。影響程度的估計是基于已知發生的事件和那些可合理地預見的事件。
對于用藥后釋放的降解成分，可能沒有明顯的環境影響。部分降解的成分可能在環境中進一步降解，最終達到與天然存在的成分無法區分的程度（例如，GTVVs的DNA序列被降解為天然存在的序列和核苷酸時）。
GTVVs的部分降解成分可能會保留一定程度的可檢測的生物活性。例如，即使在有限的降解之后，超螺旋質粒仍然可以保留向其他細菌轉移遺傳物質（如抗生素抗性基因）的能力。因此，應考慮抗生素耐藥基因在環境中的持久度。雖然這種事件發生的概率可能很低（在本文件第V.B.3節中討論），但如果在罕見的轉移事件發生后，抗生素耐藥性基因可能擴散到環境生物中，并可能危及現有的治療方法，那么這種事件的影響可以是重大的。
在估計影響的程度時，申請人應考慮可能特別容易被吸收或感染的人群。例如，一項涉及在具有免疫能力的研究人群中給予活的、減毒的重組痘病毒的臨床試驗可能會引起輕微的局部皮膚反應和有限的環境釋放。因為它可能導致感染，EA應考慮到在易感生物（如家庭寵物或環境中的物種）中引起疾病和傷害的可能性。
在評估效應的程度時，也應考慮遺傳的不穩定性。突變、逆轉、重組和重排可能會改變其效應程度。例如，復制缺陷的腺病毒是在能補充復制缺陷的細胞基質中產生的。這可能導致低水平的復制能力腺病毒（RCA）的形成，這是載體基因組和細胞基因組之間重組的結果。即使RCA水平被嚴格監控，您也應該考慮攜帶轉基因的具有復制能力的腺病毒在環境中釋放的潛在規模。
3.評估環境影響的可能性
對可能性的評估既要基于已知發生的事件，也要基于那些合理地可預見的事件。
例如，如果釋放了具有生物活性（例如，能夠轉導和/或復制）的GTVVs，您應該考慮感染、持續存在或定植的可能性。這將包括對涉及向性、宿主范圍和選擇壓力的因素進行評估，這些因素可能使生存的可能性增加或縮小。
環境影響的可能性可通過實驗進行評估，包括：
a. 從患者身上釋放到環境中的GTVVs及其代謝物的數量。
b. 環境衰減和半衰期的測定。
c. 易感物種吸收頻率和感染劑量的估計。
d. 衡量“適應性”——GTVVs與環境中其他類似物的競爭程度。
e. 突變或恢復毒力的比率。
獲取實驗數據以解決這些問題（如有必要）可能需要相當長的時間和計劃。我們建議您在早期試驗期間咨詢監管局，以了解在提交BLA時EA中需要呈現哪些類型的數據作支持。
4.如何評估整體的環境風險
根據前面的章節（本指導文件第V.B.1至3節），應該對整體環境風險進行評估。為了估計環境風險，每個環境影響的程度是和影響發生的概率相結合。風險評估可用定性的術語進行描述，從高、中、低到忽略不計。
C.解決措施
本節應描述為避免或減輕整體環境風險而采取的任何措施，可包括停用、遏制、限制接觸或監測產品放行的程序。您應該說明是否未發現任何環境影響。
在大多數情況下，可以通過減少暴露的可能性來實施降低環境風險的程序。緩解措施的一些例子包括：
1. 增加衛生措施和廢物處理的要求。
2. 在適當的生物封閉條件下處理GTVVs。
3. 盡量減少患者與易感人群或物種的接觸。
4. 采取控制措施以盡量減少氣溶膠的形成。
D.提出替代方案
如果某項申報或一組相關申報被確認對環境有潛在的不利影響，EA必須 “討論任何提供減少環境風險或對環境有利的任何合理替代方案”（21 CFR 25.40(a)）。可提出減輕個別影響的措施，并視這些措施的充分性而定，以降低總體風險水平（也見本文件第V.B.4節）
參考文獻
1.FDA Guidance for Industry: Environmental Assessment of Human Drug and Biologics Applications, July 1998,http://www.fda.gov/downloads/Drugs/GuidanceComplianceRegulatoryInformation/Guidances/ucm070561.pdf
2.Coordinated Framework for Regulation of Biotechnology, June 26, 1986, 51 FR 23302,
http://www.aphis.usda.gov/brs/fedregister/coordinated_framework.pdf.
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