1、原理是：提取組織或細胞中的總RNA，以其中的mRNA作為模板，采用Oligo（dT）或隨機引物利用逆轉錄酶反轉錄成cDNA。
2、再以cDNA為模板進行PCR擴增，而獲得目的基因或檢測基因表達。
3、該技術主要用于：分析基因的轉錄產物、獲取目的基因、合成cDNA探針、構建RNA高效轉錄系統。
(資料圖片僅供參考)
4、RT- PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）即逆轉錄PCR，是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。
5、首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。
6、RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用于檢測細胞中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。
7、作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。
8、無論使用何種RNA，關鍵是確保RNA中無RNA酶和基因組DNA的污染。
9、用于反轉錄的引物可視實驗的具體情況選擇隨機引物、Oligo dT 及基因特異性引物中的一種。
10、對于短的不具有發卡結構的真核細胞mRNA，三種都可。
11、擴展資料反轉錄酶的選擇Money 鼠白血病病毒（MMLV）反轉錄酶：有強的聚合酶活性，RNA酶H活性相對較弱。
12、最適作用溫度為37℃。
13、2、禽成髓細胞瘤病毒（AMV）反轉錄酶：有強的聚合酶活性和RNA酶H活性。
14、最適作用溫度為42℃。
15、3、Thermus thermophilus、Thermus flavus等嗜熱微生物的熱穩定性反轉錄酶：在Mn存在下，允許高溫反轉錄RNA，以消除RNA模板的二級結構。
16、4、MMLV反轉錄酶的RNase H突變體：商品名為SuperScript 和SuperScriptⅡ。
17、此種酶較其它酶能多將更大部分的RNA轉換成cDNA，這一特性允許從含二級結構的、低溫反轉錄很困難的mRNA模板合成較長cDNA。
18、參考資料：百度百科——RT -PCR。
本文到此分享完畢，希望對大家有所幫助。
標簽：
